发酵罐灭菌之后,就可以用来培养细菌了。
1.发酵罐接上pH电极的插头, 接通底部冷却水管和空气出口处的冷凝器上的冷却水管, 将各硅酮管置于相应的蠕动泵上。
2.把搅拌马达置于搅抖联动装置上。
3.把光标调到“Temperature”档,设定一个合适的温度。
4.校正溶氧电极的满刻度。
1)利用光标将搅拌速度调至 大转速,一般为800 r/min,把通气量调节到1.0 L Air/L medium/min(1VVM)。
2)调到calibration界面,光标调至溶氧处,“span”档,设定读数为100,反复调节几次,直至稳定至100,转至menu界面。
5.其他参数设定。把光标调到Agit档,设定 小值为200 r/min。把光标调到DO档,设定参数为合适的值, 调整为与溶氧偶联检测。把光标调到Agit档,设定 大值为800 r/min;把光标调到pH档,设定参数为7.0,调整为自动检测;接上酸(碱)瓶,并打开自动检测系统。
6.接种:发酵罐的接种就是将蘸满乙醇的棉花球缠在接种口外套上, 点燃火焰以前将接种口的盖子旋松。然后点燃发酵罐上的棉花球, 取掉盖子, 立即在火焰中加入各组分培养基和种子液。 后将盖子浸泡在乙醇中, 接种后, 用摄子将盖子准确放回原位, 旋紧。
7.打开记录实验过程的专用软件。
8.发酵过程中,每隔两小时记录溶氧、转速、测定OD600,取样品5 mL储存进行各种分析检测。
认真的对照上面的步奏进行,发酵缸的操作就顺利完成了。